Хроматограмма очистки флуоресцирующих антител от примесей и свободного флуорохрома. 1) Определите в какой фракции находится свободный флурохром, в какой конъюгат, в каких примеси. Объясните вашу точку зрения. 2) Приготовленный препарат флуоресцирующих антител должен быть стандартизован. Одним из параметров, характеризующим конъюгат является соотношение флуорохрома и иммуноглобулина. Оно вычисляется по следующей формуле: K p б = 2.87 A 495 A 280 − ( 0.35 A 495 ) б Kp ​ = A 280 ​ −(0.35A 495 ​ ) 2.87A 495 ​ ​ , где Кр – количество молекул ФИТЦ, б – количество молекул белка. А495 – поглощение при длине волны 495, А280 – поглощение при длине волны 280 нм. Определите в каком диапазоне может находиться отношение Кр/б, если оптимальное соотношение А495/А280 находится в диапазоне от 0,5 до 1,5. Укажите ответ округляя значения до целого числа.

1. Свободный флуорохром будет находиться в фракции, которая выходит первой на хроматограмме, так как он не связан с иммуноглобулином. Флуоресцирующий конъюгат будет находиться во второй фракции, так как он связан с иммуноглобулином. Примеси будут находиться в различных фракциях, в зависимости от их свойств и взаимодействий с другими компонентами.

2. Для определения диапазона отношения Кр/б, необходимо рассмотреть формулу и условие оптимального соотношения А495/А280. Из формулы видно, что значение Кр/б будет зависеть от отношения поглощения при 495 нм к поглощению при 280 нм.

Если оптимальное соотношение А495/А280 находится в диапазоне от 0,5 до 1,5, то отношение Кр/б будет находиться в диапазоне от 1,5 до 4,5 (поскольку 2,87 * 0,5 = 1,435 и 2,87 * 1,5 = 4,305).

Таким образом, отношение Кр/б может находиться в диапазоне от 1 до 5.