округляя значения до целого числа. 3) Концентрацию белка в препарате определяют по формуле: C ( m g / m l ) = A 280 − ( 0.35 A 495 ) 1.4 C(mg/ml) = 1.4 A 280 ​ −(0.35A 495 ​ ) ​ Определите концентрацию очищенных флуоресцирующих антител, округляя до сотых. 4) Определите молярное соотношение красителя к иммуноглобулинам в препарате флуоресцирующих антител, если ФИТЦ брали в количестве 3 мг, антител - 100 мг, а конъюгация прошла на 60%. Сделайте вывод о возможности применения данного конъюгата для иммунофлуоресценции. 5) Определите для получения каких из представленных изображений были использованы антитела, конъюгированные ФИТЦ. Ответ обоснуйте. Справочные данные: молекулярная масса ФИТЦ 389 г/моль, примесей – 70 г/моль, иммуноглобулинов – 150000 г/моль.

3. Подставим значения A280 = 0.8 и A495 = 0.2 в формулу:

C(mg/ml) = 1.4 * 0.8 - (0.35 * 0.2) = 1.12 - 0.07 = 1.05

Таким образом, концентрация очищенных флуоресцирующих антител составляет 1.05 мг/мл.

4. Для определения молярного соотношения красителя к иммуноглобулинам в препарате, нужно сначала определить количество иммуноглобулинов, которые участвовали в конъюгации:

100 мг * 0.6 = 60 мг иммуноглобулинов

Теперь определим количество молей каждого компонента:

Моль ФИТЦ = 3 мг / 389 г/моль = 0.0077 моль Моль иммуноглобулинов = 60 мг / 150000 г/моль = 0.0004 моль

Таким образом, молярное соотношение ФИТЦ к иммуноглобулинам составляет примерно 19:1. Это соотношение позволяет использовать данный конъюгат для иммунофлуоресценции.

5. Для получения изображений, где используются антитела, конъюгированные ФИТЦ, необходимо использовать метод иммунофлуоресценции. В данном методе антитела, специфические к определенному антигену, маркируются ФИТЦ для визуализации под микроскопом. Таким образом, изображения, где видны яркие точки или пятна, скорее всего были получены с использованием антител, конъюгированных ФИТЦ.